儀器分析課程設(shè)計

一、 課程信息

課程性質(zhì)：專業(yè)必修課

學時：114學時（理論66學時+實驗48學時）

授課對象：化工分析與檢驗專業(yè)

所選教材：《儀器分析》(第二版) 熊開元、賀紅舉主編 中等職業(yè)學校規(guī)劃教材 化學工業(yè)出版社

二、課程定位

儀器分析作為現(xiàn)代的分析測試手段，正日益廣泛地為許多領(lǐng)域內(nèi)的科研和生產(chǎn)提供大量的物質(zhì)組成和結(jié)構(gòu)等方面的信息，因而儀器分析是職校化工類化學檢驗專業(yè)的一門主干課，是學生在學完本專業(yè)的基礎(chǔ)課并掌握了必要的基本實驗操作技能之后，開設(shè)的一門專業(yè)必修課。儀器分析法是測定物質(zhì)化學組成、狀態(tài)、結(jié)構(gòu)的重要分析方法。當今實際分析過程大部分趨向于采用儀器分析手段，如果不通過儀器分析課程加深對學生職業(yè)技能和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)，學生掌握的知識就會落后于社會需要，走上工作崗位后就會缺乏相應(yīng)的適應(yīng)能力和發(fā)展能力。

本課程除要求學生掌握必要的專業(yè)理論知識外，更注重和強調(diào)學生實驗動手能力的培養(yǎng)，儀器分析實驗作為儀器分析課程的實踐教育環(huán)節(jié)是不可或缺的，是一門實驗技術(shù)性很強的課程。為學生以后從事化學檢驗工作打下良好的基礎(chǔ)。它以無機化學、有機化學、分析化學等課程的學習為基礎(chǔ)，為下一步進行頂崗實習的基礎(chǔ)。

三、課程教學設(shè)計理念和思路

理論與實驗相結(jié)合，職業(yè)教育的根本目標和任務(wù)是培養(yǎng)和造就實踐技能型人才，而實驗教學，又是培養(yǎng)和造就實踐技能型人才的最重要的手段和措施。儀器分析課程是化學分析檢驗專業(yè)的實踐課程之一，是對學生進行基本技能訓(xùn)練的重要環(huán)節(jié)。通過本課程的實踐和訓(xùn)練，一方面可以對學生的基礎(chǔ)理論知識加以檢驗、鞏固和提高，做到理論聯(lián)系實際，提高學生創(chuàng)造能力；另一方面可以使學生掌握實驗的基本原理、各種儀器的基本操作，培養(yǎng)學生運用儀器分析的手段解決實際問題的能力，培養(yǎng)他們的創(chuàng)新精神和嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。如何在較短的時間內(nèi)，使學生既掌握常見儀器分析方法基本原理，了解各種儀器的結(jié)構(gòu)，熟悉各種儀器的使用方法，掌握各種儀器的原理，充分理解課堂上的理論知識，是儀器分析教學的重點。本著以以職業(yè)能力培養(yǎng)為重點，與企業(yè)合作，根據(jù)唐山現(xiàn)有企業(yè)發(fā)展需要和完成檢驗工工作任務(wù)所需要的知識、能力、素質(zhì)要求。本課程倡導(dǎo)項目教學法，以工作任務(wù)為中心組織課程內(nèi)容，發(fā)展職業(yè)能力。

總體設(shè)計思路是，課程內(nèi)容既符合教學大綱要求，又能與生產(chǎn)實際結(jié)合緊密，實現(xiàn)專業(yè)對接產(chǎn)業(yè)、課堂對接社會。突出對學生職業(yè)能力的訓(xùn)練，并融合了相關(guān)職業(yè)資格證書對知識、技能、態(tài)度的考核。

四、課程教學任務(wù)與目標

（一）課程教學的主要任務(wù)

儀器分析課程的主要任務(wù)是向?qū)W生講授各種常見儀器分析的基本知識，基本理論和基本方法，講授各種常用分析儀器的結(jié)構(gòu)原理及操作，訓(xùn)練學生正確地安裝調(diào)試、校正、使用和維護常用的分析儀器，培養(yǎng)學生具有較強的實驗動手能力和良好的專業(yè)素質(zhì)。為后續(xù)工業(yè)分析等專業(yè)課程的學習和化學檢驗工技能考證打下必要的基礎(chǔ)。

（二）課程教學的目標

1、職業(yè)能力目標

（1）儀器使用和操作；

（2）日常維護和常規(guī)故障排除；

（3）數(shù)據(jù)處理分析及報告；

（4）具有一定的信息遷移能力，能根據(jù)不同型號的儀器說明書達到對該儀器的認知、操作。

2、知識目標

（1）掌握紫外分光光光度法、原子吸收光譜法、電位分析及氣相色譜法的基礎(chǔ)知識、基本理論、基本方法，并了解這些方法在生產(chǎn)實際工作中的應(yīng)用。

（2）掌握標準曲線法、比較法、標準加入法、歸一化法、內(nèi)標法、外標法等定量方法。

（3）掌握常見型號的紫外可見分光光度計、原子吸收分光光度計、酸度計、氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)原理、安裝調(diào)試、校正、使用及維護等實驗操作技術(shù)及有關(guān)的安全防護知識。

（4）掌握數(shù)據(jù)處理的方法及檢驗報告的標準格式和要求。

3、職業(yè)素養(yǎng)目標

（1）培養(yǎng)學生良好的職業(yè)道德。

（2）培養(yǎng)學生嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L和安全意識。

（3）培養(yǎng)學生精益求精的學習態(tài)度。

五、課程教學內(nèi)容與學時分配

（一）理論課程內(nèi)容

緒論

【教學目的和要求】使學生了解現(xiàn)代儀器分析的主要內(nèi)容、特點和發(fā)展趨勢及其在科學研究、生產(chǎn)和生活實際中的應(yīng)用現(xiàn)狀，明確學習目的和要求，樹立學習信心和積極性。

【重點和難點】

重點：現(xiàn)代儀器分析方法的主要類型及其重要性。

難點：儀器分析與化學分析的聯(lián)系與區(qū)別，現(xiàn)代儀器分析方法的主要類型。

一、儀器分析法及其特點

二、儀器分析的基本內(nèi)容和分類

三、儀器分析的發(fā)展趨勢

第一章 電位分析法

【教學目的和要求】使學生了解電位分析法的基本原理，電位法測定溶液的pH值，離子選擇性電極和膜電位的有關(guān)知識，初步了解離子選擇性電極的種類和性能及其應(yīng)用，電位滴定方法及其相關(guān)儀器的使用，能利用酸度計進行溶液pH值測定，利用電位滴定法進行未知溶液濃度測定。

【重點和難點】

重點：電位分析法原理，離子選擇性電極和膜電位，電極的選擇，儀器的使用。

難點：離子選擇性電極和膜電位，電極的選擇性。

第一節(jié) 電位分析法基本原理

1、概述

2、液體接界電位

3、膜電位

第二節(jié) 參比電極

1、甘汞電極

2、銀-氯化銀電極

第三節(jié) 指示電極

1、 金屬電極

2、 離子選擇性電極

第四節(jié) 直接電位法測定溶液的pH

1、 直接電位法測定溶液的pH的原理

2、 pH標準緩沖溶液

3、 測量儀器

第五節(jié) 直接電位法測定溶液中離子的活度

1、 測定原理

2、 離子選擇性電極測定離子濃度的條件

3、 定量分析方法

4、 影響離子濃度測定準確度的因素

第六節(jié) 電位滴定法

1、 電位滴定法基本原理

2、 判斷終點的方法

3、 電位滴定類型及電極的選擇

4、 電位滴定法的應(yīng)用

第三章 比色分析和分光光度分析法

【教學目的和要求】使學生掌握比色和分光光度法原理及其方法應(yīng)用。熟悉722N型分光光度計的結(jié)構(gòu)并能夠熟練操作，能利用722N型分光光度計對實際樣品進行測定。

【重點和難點】

重點：分光光度法原理，定量分析方法，儀器的操作使用，數(shù)據(jù)處理。

難點：儀器故障排除，實驗條件控制。

第一節(jié) 比色法和分光光度法的基本知識

1、光的特性

2、光的互補色

3、光的選擇性吸收

第二節(jié) 比色分析和分光光度分析的基本原理

1、朗伯比爾定律

2、偏離朗伯比爾定律的原因

第三節(jié) 顯色反應(yīng)的條件

1、顯色反應(yīng)和顯色劑

2、顯色反應(yīng)的條件

3、 共存離子的干擾和消除

第四節(jié) 比色分析的儀器和方法

1、光電比色計和光電比色法

2、目視比色法

第五節(jié) 分光廣度分析的儀器和方法

1、722N型分光光度計

2、定量分析方法

第四章 原子吸收光譜分析法

【教學目的和要求】使學生了解原子吸收分光光度分析的基本原理，原子吸收分光光度計，實驗技術(shù)及定量分析方法，初步了解原子吸收分光光度計的使用。

【重點和難點】

重點：原子吸收光譜法的基本原理，原子吸收分光光度計及定量分析方法。

難點：原子吸收光譜法的基本原理，定量分析方法。

第一節(jié) 原子吸收光譜法的基本原理

1、共振線與吸收分析線

2、基態(tài)原子數(shù)與火焰溫度的關(guān)系

3、吸光度與原子濃度的關(guān)系

第二節(jié) 原子吸收分光光度計

第三節(jié) 原子吸收光譜分析的測量技術(shù)

1、儀器工作條件的選擇

2、干擾測定的因素和消除的方法

3、常用的定量方法

第五章 氣相色譜分析法

【教學目的和要求】使使學生了解氣相色譜分析的特點，氣相色譜儀器的基本結(jié)構(gòu)及其檢測器，氣相色譜固定相及其選擇、填充柱和毛細管柱色譜方法，初步了解氣相色譜儀的使用。

【重點和難點】

重點：氣相色譜儀及其檢測器 ，氣相色譜固定相及其選擇。

難點：氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)，檢測器分類，氣相色譜固定相及其選擇。

第一節(jié) 概述

1、氣相色譜法簡介

2、氣相色譜分析流程

3、色譜分析術(shù)語

第二節(jié) 氣相色譜的基本原理

1、氣相色譜分離原理

2、塔板理論

3、速率理論

4、分辨率

5、分離操作條件的選擇

第三節(jié) 氣相色譜儀

第四節(jié) 氣相色譜固定相

第五節(jié) 氣相色譜檢測器

1、熱導(dǎo)池檢測器

2、氫火焰離子化檢測器

第六節(jié) 氣相色譜定性定量方法

1、定性分析方法

2、定量分析方法

（二）實驗教學內(nèi)容

1、概況：儀器分析實驗是化學專業(yè)必修的基礎(chǔ)課程之一。它是建立在無機化學實驗、分析化學實驗、有機化學實驗、物理學實驗基礎(chǔ)上的后續(xù)課程。它使學生獲得有關(guān)實驗的基本理論、基本知識和操作技能。它為后續(xù)課和今后的科研工作打下扎實的操作技能。它是許多學科進行科學研究不可缺少的重要測試手段。

2、實驗報告要求：數(shù)據(jù)處理科學準確，繪圖規(guī)范。

3、主要儀器設(shè)備：722N型可見分光光度計、pHS-3C酸度計、原子吸收光譜儀及氣相色譜儀。

實驗項目一覽表

學時分配表

六、教學基本要求

教師在課堂上應(yīng)對分析化學的基本概念、規(guī)律、原理和方法進行必要的講授，并詳細講授每章的重點、難點內(nèi)容；并應(yīng)采用多媒體輔助教學，加大課堂授課的知識含量。實驗教學重視基本操作、基本技能的訓(xùn)練，鍛煉學生獨立分析問題、解決問題的能力。

七、教學方法

本課程采用多媒體與傳統(tǒng)板書相結(jié)合的教學方法?？荚囍饕捎瞄]卷方式，考試范圍應(yīng)涵蓋所有講授的內(nèi)容，考試內(nèi)容應(yīng)能客觀反映出學生對本門課程主要概念的記憶、掌握程度，對有關(guān)理論的理解、掌握及綜合運用能力。

總評成績：平時成績10%、實驗成績20%、理論課成績70%。

八、參考教材和閱讀書目

1、《儀器分析實驗》，段科欣，化學工業(yè)出版社，2009年，第一版。

2、《儀器分析實驗》，劉小珍，化學工業(yè)出版社，2006年，第二版

3、《食品理化檢驗技術(shù)》，劉丹赤，大連理工大學出版社，2010年，第一版。

九、本課程與其它課程的聯(lián)系與分工

該課程是基礎(chǔ)化學、有機化學等的后續(xù)課程，將為學生中級工及高級工鑒定打下堅實的技術(shù)基礎(chǔ)。

十、實驗教學單元設(shè)計示例

附實驗報告

實驗題目 波長讀數(shù)測定

實驗日期 實驗人 同組人員 指導(dǎo)教師

一、 實驗?zāi)康?/span>

1、掌握吸收光譜曲線的繪制方法

3、了解722N型分光光度計波長讀數(shù)的校正方法

4、掌握722N型分光光度計的使用方法

二、校正方法

配一個已知λ_Max的物質(zhì)的適當溶液，然后用待校正的儀器在該物質(zhì)的λ_Max正負20nm范圍內(nèi)，用不同的波長測定其吸光度值。

λ_校=λ_最大-λ^﹐_最大

當λ校為正值時，表示該儀器的波長讀數(shù)叫真實的波長偏低；當λ校為負值時，表示該儀器的波長讀數(shù)叫真實的波長偏高。在使用該儀器時，若測定某一溶液時所需選定的波長為λ_測，則應(yīng)調(diào)至的波長讀數(shù)（λ_讀）為

λ_讀=λ_測—λ_校

三、試劑與儀器

試劑：1.0mg/mL溴甲酚綠溶液

儀器：722N分光光度計；容量瓶100mL1只；移液管100mL1支。

四、實驗過程

取溴甲酚綠溶液1.00 mL于100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。以蒸餾水作空白，用1cm比色皿，用不同波長的單色光測定其吸光度（波長從595nm

至635nm）。

注意：每改變一次波長都要用空白溶液作參比調(diào)一次100%透射比，然后再測其吸光度。

五 實驗記錄、分析結(jié)果與作出結(jié)論

繪制吸收曲線：

由吸收曲線知λ^﹐_最大為

六 問題與討論

實驗題目 高錳酸鉀含量測定

實驗日期 實驗人 同組人員 指導(dǎo)教師

一 實驗?zāi)康?/span>

1、掌握用分光光度法測定物質(zhì)含量的方法
2、熟悉如何尋找最大吸收波長以及吸收光譜曲線和標準曲線的繪制方法

3、能分析所測數(shù)據(jù)，并得出結(jié)果

二 實驗原理

高錳酸鉀溶液呈紫紅色，在可見光區(qū)具有固定的最大吸收波長位置，峰形明顯。在避光條件下保存，其峰位和峰形可長期穩(wěn)定不變，可用分光光度法對其進行定性和定量分析。

三 試劑與儀器

1、儀器 722N型分光光度計吸量管1、5、10mL燒杯、洗瓶、洗耳球容量瓶100mL

2、試劑KMnO₄標準溶液（500μg/mL）、蒸餾水 未知液150---180μg/mL

四 實驗過程

1、KMnO₄工作溶液的配制（50μg/mL）

移取KMnO₄標準溶液10.00mL置于100mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻，備用。

2、測定KMnO₄吸收光譜λ_最大值

在分光光度計上，以蒸餾水為空白溶液，依次選擇不同波長，測定KMnO₄工作溶液（50μg/mL）在不同波長下的吸光度A，并記錄在下表中，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制吸收曲線。在曲線上找出最大吸收波長。

3、標準曲線的繪制

分別吸取KMnO₄標準溶液（500μg/mL）1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于5個100容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計上，以蒸餾水為參比，在λ_最大處依次測定所配標準系列溶液的吸光度，將結(jié)果填到下表中。以溶液的濃度為橫坐標，相應(yīng)的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

4、待測溶液的測定

取未知溶液10.00mL于100mL容量瓶中，用去離子水稀釋到刻度，搖勻，在分光光度計上測出吸光度A。

五 實驗記錄、分析結(jié)果與作出結(jié)論

1.光吸收曲線繪制 λmax=

2、標準曲線

繪圖（A----C曲線）

六 結(jié)果計算

從標準曲線上查得待測液的濃度Cx。根據(jù)標準曲線查得待測液的濃度，根據(jù)稀釋倍數(shù)求得未知試樣中高錳酸鉀溶液的濃度。

C未知=Cx*100/10

七 問題與討論

實驗題目 純堿中微量鐵含量測定

實驗日期 實驗人 同組人員 指導(dǎo)教師

一 實驗?zāi)康?/span>

1、鞏固分光光度法的理論知識。

2、掌握722N型分光光度計的使用方法。

3、學會繪制光吸收曲線，并學會從曲線上選擇定量測定的入射光波長。

4、學會繪制標準曲線，并利用標準曲線求得分析結(jié)果。

二 實驗原理

鄰菲羅啉（又稱鄰二氮雜菲）是測定微量鐵的一種較好的顯色劑，在pH=2～9的條件下，Fe²⁺與鄰菲羅啉生成極穩(wěn)定的橙紅色的絡(luò)合物，反應(yīng)式如下：

當鐵以Fe³⁺形式存在于溶液中時，Fe³⁺與鄰菲羅啉也生成1:3的淡藍色配合物，但穩(wěn)定性較差。故在顯色前，首先用鹽酸羥胺把Fe³⁺還原為Fe²⁺：

4Fe³⁺+2NH₂OH═4Fe²⁺+N₂O+H₂O+4H⁺

測定時，控制溶液酸度在pH=4～6較適宜，酸度過高，反應(yīng)速度慢，酸度太低，則Fe²⁺水解，影響顯色。鄰菲羅啉鐵的最大吸收波長為510nm。

三 試劑與儀器

1、儀器

722N型分光光度計，容量瓶（50mL，100mL、1000mL），吸量管（1mL 、2mL 、5mL 、10 mL），1cm比色皿。

2、試劑

（1）100μg/mL Fe³⁺標準儲備液 準確稱取0.8634g分析純NH₄Fe(S0₄)₂·12H₂O于200mL燒杯中，加入20mL 6 mol.L^-1 HCl和少量水，溶解后轉(zhuǎn)移至1L容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。

（2）10%鹽酸羥胺 稱取10g鹽酸羥胺溶于100mL蒸餾水中，搖勻。

（3）0.15%鄰菲啰啉 稱取0.15g鄰菲啰啉，先用少量的乙醇溶解，再用蒸餾水稀釋至100mL，搖勻。

（4）1mol/L醋酸鈉

（5）待測樣品

四 實驗過程

1、10μg/mL鐵工作溶液配制 準確移取10.00mLFe³⁺ 標準儲備液(100μg/mL)于100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。

2、標準系列溶液的配制 準確吸取10μg/mL鐵工作溶液0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于六只50mL容量瓶中，各分別加入10%的鹽酸羥胺1mL，搖勻，再分別加入0.15%的鄰菲啰啉2mL 和NaAC溶液5mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置10min。

3、吸收曲線繪制 用1cm吸收池，以空白溶液（“0”號）做參比溶液，選“3”號作為樣品測定配合物在不同波長下的吸收情況，繪制吸收光譜曲線，確定最大吸收波長（λ_max =510nm）。

4、標準曲線繪制 在λmax處，以空白溶液做參比溶液，測定各標準系列溶液的吸光度，以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標作圖，即得標準曲線。

5、樣品的處理與測定 稱取樣品純堿4.000g入100mL燒杯中，緩慢加入(1+1)鹽酸10mL左右至全部溶解，小心轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，按上述方法顯色，并測定其在510nm處的吸光度A_x。

五 實驗記錄、分析結(jié)果與作出結(jié)論

1光吸收曲線繪制 λmax=

繪圖

2標準曲線

繪圖

六 結(jié)果計算

計算樣品純堿中鐵含量為：

ω（Fe）= ×100%

七 問題與討論

實驗題目 尿素中微量鐵含量測定（磺基水楊酸）

實驗日期 實驗人 同組人員 指導(dǎo)教師

一 實驗?zāi)康?/span>

1、掌握標準曲線的繪制方法

2、練習722N型分光光度計的使用方法

3、掌握利用標準曲線進行待測液濃度計算

二 實驗原理

在pH 8～11的氨性溶液中，Fe³⁺與磺基水楊酸生成穩(wěn)定的黃色絡(luò)合物，其反應(yīng)式：　Fe³⁺+3SSal^2-=［Fe(SSal)₃]^3-，式中　SSal^2---磺基水楊酸根離子，最大吸收波長430 nm，顏色的深淺與Fe³⁺的含量成正比。Fe²⁺在氨堿性溶液中極易氧化成Fe³⁺，同樣與磺基水楊酸形成黃色配合物。

　　Fe³⁺在不同的pH下可以與磺基水楊酸形成不同組成和顏色的幾種絡(luò)合物。在pH1.8～2.5的溶液中，形成紅紫色的［Fe(SSal)⁺；在pH 4～8的溶液中，形成褐色的［Fe(SSal)²}^-；在pH 8～11.5的氨性溶液中，形成黃色的［Fe(SSal)³］^3-；若pH＞12，則不能形成絡(luò)合物而生成氫氧化鐵沉淀。
三 試劑與儀器

儀器：722N分光光度計 100mL容量瓶 5mL移液管 量筒（50、20mL）

試劑：磺基水楊酸(0.1g/mL)、氨水（1+1）、鹽酸（1+1）

硫酸鐵銨標液（0.1mg/mL）：稱取0.6039gNH₄Fe(SO₄) ₂.12H₂O 溶于水中，加濃硫酸2.5 mL，移入1L容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

尿素樣品

四 實驗過程

1、標準溶液的配制

準確吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL鐵標準溶液于六個100mL容量瓶中，加蒸餾水約40mL，搖勻。分別加入10mL鹽酸（1+1）、5mL磺基水楊酸、15mL氨水溶液（1+1），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。

2、標準曲線繪制

以空白溶液為參比，用430nm的單色光分別測定標準系列的吸光度，將結(jié)果填到下表。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

3、 樣品測定

稱取尿素試樣10.0克，加40mL蒸餾水和10mL鹽酸（1+1），煮沸3min，冷卻后轉(zhuǎn)入100100mL容量瓶中，5mL磺基水楊酸、15mL氨水溶液（1+1），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，以空白溶液為參比，用430nm的單色光測定試樣吸光度。從標準曲線上計算尿素中三氧化二鐵的含量。

五 實驗記錄、分析結(jié)果與作出結(jié)論

標準曲線

繪圖（A----C曲線）

六 結(jié)果計算

尿素中鐵含量可按下式計算

ω（Fe₂O₃）=ρx*10^-6*100/m*100%

式中ρx------由試樣溶液的吸光度在標準曲線上查出的相應(yīng)的Fe₂O₃含量，μg/mL

m--------試樣質(zhì)量，g

七 問題與討論

實驗題目火腿腸中亞硝酸鹽含量測定

實驗日期 實驗人 同組人員 指導(dǎo)教師

一、 實驗?zāi)康?/span>

1、了解分光光度法測定亞硝酸鹽含量的實驗原理

2、掌握樣品制備、提取的基本操作技能

3、練習722N型分光光度計的使用方法

4、掌握標準曲線法進行待測液濃度計算

二、 實驗原理

樣品經(jīng)沉淀分離蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸起重氮化反應(yīng)，生成重氮化合物，再與鹽酸萘乙二胺偶合，形成紫紅色的的染料，其顏色的深淺與亞硝酸鹽的含量成正比，可與標準比較定量。通過分光光度計比色測定，計算出樣品中亞硝酸鹽的含量。

三、 試劑與儀器

試劑：飽和硼砂溶液；亞鐵氰化鉀；乙酸鋅；對氨基苯磺酸；鹽酸萘乙二胺；亞硝酸鈉標準使用液。

儀器：722N分光光度計；恒溫水浴鍋；絞肉機；常規(guī)玻璃儀器。

四、 實驗過程

1、樣品處理

稱取經(jīng)絞碎并混合均勻的樣品5克于100ml燒杯中，加硼砂飽和溶液12.5ml，攪拌均勻后，以70℃以上的熱水約300ml將樣品全部洗入500ml容量瓶中，放入沸水浴中加熱15分鐘，取出冷卻后，邊轉(zhuǎn)動容量瓶邊加入亞鐵氰化鉀溶液5ml，搖勻后，再加入乙酸鋅溶液5ml，以沉淀蛋白質(zhì)。然后，加水至刻度，混勻，放置半小時后，棄去上層脂肪，清液用濾紙或脫脂棉過濾，棄去初濾液30mL，濾液備用。

2、標準曲線的繪制

分別移取亞硝酸鈉標準使用液（5μg/mL）0.00 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL置于50 mL容量瓶中。分別加入2 mL對氨基苯磺酸溶液混勻，靜置3---5min后各加入1mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15min，于波長538nm處測吸光度，繪制標準曲線。

3、樣品測定

吸取40.00 mL樣品濾液于50 mL容量瓶中，與標準系列相同顯色過程進行吸光度值測定。

五、 實驗記錄、分析結(jié)果與作出結(jié)論

標準曲線的繪制與樣品含量測定

繪制標準曲線：

由樣品的吸光度查得相應(yīng)的含量

六、 結(jié)果計算

式中 X----樣品中亞硝酸鹽的含量，mg／kg；

m----樣品質(zhì)量，g；

m’ --- 測定用樣液中亞硝酸鹽的含量，ug．

V1----樣品處理液總體積，mL;

V2----測定用樣液體積，mL.

七、問題與討論